증폭 방법:
등온 형광 PCR : 등온 형광 PCR에서는 DNA 증폭이 일정한 온도에서 발생합니다. 이는 전체 공정에 걸쳐 반응이 일정한 단일 온도에서 일어난다는 것을 의미합니다.
실시간 PCR: 정량적 PCR(qPCR)이라고도 알려진 실시간 PCR은 열 순환 과정을 사용합니다. 여기에는 변성, 어닐링 및 확장 단계를 포함한 여러 온도 주기가 포함됩니다. 이러한 온도 사이클은 일반적으로 열순환기 기계에 의해 제어됩니다.
온도 제어:
등온 형광 PCR: 이름에서 알 수 있듯이 등온 형광 PCR은 반응 중에 일반적으로 약 60-65℃의 일정한 온도를 유지합니다. 이는 실시간 PCR에 비해 반응에 필요한 장비를 단순화합니다.
실시간 PCR: 실시간 PCR은 온도가 다양한 수준(예: 약 95℃의 변성, 약 55~65℃의 어닐링, 약 72℃의 신장) 사이에서 반복적으로 변하는 열 순환을 포함합니다. 이를 위해서는 정밀한 온도 제어 기능을 갖춘 열순환기가 필요합니다.
탐지 방법:
등온 형광 PCR: 형광 검출은 등온 형광 PCR과 실시간 PCR 모두에 사용됩니다. 그러나 등온 형광 PCR에서는 일반적으로 형광 신호가 서로 다른 온도 단계 사이를 순환할 필요 없이 연속적으로 감지됩니다.
실시간 PCR: 실시간 PCR에서는 각 온도 변화 주기 후에(일반적으로 어닐링/연장 단계 후) 형광 신호를 측정합니다. 이를 통해 열 순환 과정에서 발생하는 DNA 증폭을 실시간으로 모니터링할 수 있습니다.
신청:
등온 형광 PCR: 이 기술은 단순성과 속도가 필수적인 신속한 현장 검사와 같은 특정 응용 분야에 적합합니다. 특정 DNA 서열의 정성적 검출에 사용될 수 있습니다.
실시간 PCR: 실시간 PCR은 DNA의 정성 및 정량 분석에 널리 사용됩니다. 이는 매우 민감하며 샘플 내 DNA의 초기 양을 측정할 수 있으므로 유전자 발현 분석, 바이러스 로드 정량화 및 유전형 분석과 같은 응용 분야에 유용합니다.
요약하면, 등온형광 PCR과 실시간 PCR의 주요 차이점은 온도 조절과 증폭 방법입니다. 등온 형광 PCR은 반응 전반에 걸쳐 일정한 온도를 유지하므로 간단하고 빠른 응용 분야에 적합한 반면, 실시간 PCR은 열 순환을 포함하며 광범위한 정량적 및 정성적 DNA 분석 응용 분야에 사용됩니다.