도 1 고체상 폴리펩티드 개략도
1963년 Merrifield는 고체상 펩타이드 합성법을 제안하여 펩타이드 연구의 폭을 넓히고 분자생물학 및 기타 분야의 발전을 크게 촉진했습니다. 이 때문에 메리필드는 1984년 노벨 화학상을 수상했다.
1990년대 이래로 폴리펩타이드 합성 기술이 점진적으로 성숙함에 따라 점점 더 많은 활성 폴리펩타이드가 개발되어 의약, 식품, 화장품, 농업, 축산 등의 분야에서 널리 적용되었습니다. 고체상 폴리펩타이드 합성 방법도 널리 사용되어 왔다. 본 논문에서는 Solid Phase Peptide Synthesis Reactor에 따른 펩타이드의 고상 합성과 분해를 소개한다.
그림 2 완전한 고체상 폴리펩타이드 합성 반응기의 현장 적용
I. 수지 균열
나. 밥을 먹이다
수지를 고상에 첨가하여 합성하고, 팽윤을 위해 DCM을 첨가하고, 배수하고, 세척을 위해 DMF를 첨가하고, 세척 후, 대기를 위해 배수한다.
ii. 응축
일정량의 DMF에 아미노산을 녹이고 활성화를 위한 축합제를 첨가하고 고체상 합성기에 넣고 DMF를 반응 농도까지 보충하고 교반하여 반응시킨다.
iii. 보호기 제거 카이저 시약으로 반응 정도를 감지했습니다. 반응이 완료된 후 용매를 펌핑하여 DMF로 세척하였다. PIP/DMF 용액을 추가하여 보호 그룹을 제거했습니다. 반응 정도는 Kaiser 시약으로 검출하였다. 반응 종료 후 용매를 펌핑하여 DMF 세척 후 다음 아미노산을 첨가하였다.
iv.응축 주기
수지 서열에 따라 아미노산을 순차적으로 연결하고, "탈보호-세정-활성화 아미노산 공급-축합-세척"의 단계에 따라 축합 사이클 조작을 수행하고, 나머지 n개의 아미노산을 아미노산 서열에 따라 축합 완료 .
나. 방전
합성 후, 수지를 IPA 및 DCM으로 교차 세척하여 수지 수축을 완료하고 스테인리스 스틸 트레이로 배출하였다.
ii. 수지 건조
상온의 진공 건조 오븐에서 수지를 건조하고 건조 후 무게를 측정하여 수율을 계산합니다.
iii. 유기 폐액 회수, 중앙 집중식 처리.
iv. 청산
운영자는 작업 후 제 시간에 현장을 정리해야 합니다.
I. 수지 균열
나. 액체 준비
그 용해액을 용해액의 성분 비율에 따라 조제하고, 미리 용해액을 냉동고에 넣어 냉장 보관한다.
ii. 밥을 먹이다
반응 케틀에 펩타이드 수지를 넣고 미리 냉각된 분해액을 넣고 교반하여 반응시킨다.
iii. 방전
분해 후 그 반응액을 배출하고, 여과하여 수지를 제거하고, TFA로 세정한다.
iv. 집중
분해된 액체를 회전 증발기로 옮겨 실온에서 소량으로 농축합니다.
v. 강수
농축된 반응 용액을 미리 냉각된 메틸 tert-부틸 에테르(에테르로 약칭)에 붓고 교반하여 다량의 고체를 침전시킨다.
vi. 원심분리
탁한 액체를 원심분리하고 미리 냉각된 에테르로 세척합니다.
나. 조 펩타이드 건조
정제된 조 펩티드를 실온에서 건조하기 위해 진공 건조 오븐으로 옮겼다.
ii. 유기 폐액 회수, 중앙 집중식 처리.
iii. 청산
운영자는 작업 후 제 시간에 현장을 정리해야 합니다.
도 3 완전한 세트 고체상 폴리펩티드 절단 케틀
실제 생산 과정에서 크래킹된 조 펩타이드도 정제, 농축, 여과, 동결 건조 등의 과정을 거쳐야 하며, 이에 대해서는 본 논문에서 자세히 설명하지 않는다.
현재, 짧은 펩타이드 사슬의 합성 과정은 비교적 성숙된 반면, 분자량이 크고 펩타이드 사슬이 긴 단백질 물질의 경우 고체상 합성 기술에는 일정한 한계가 있으며, 한편, 높은 비용 및 부작용이 동반됩니다. 따라서, 펩타이드의 고상 합성을 기반으로 하는 새로운 방법을 여전히 찾아야 합니다.